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操作高效液相色谱仪的规程

时间:2011-09-15 10:01来源:未知 作者:江子君 点击:
目的 规范 日本岛津 LC-2010A 型 高效液相色谱仪 的使用。 范围 适用于 日本岛津 LC-2010A 型 高效液相色谱仪 的使用。 规程 系统组成 本系统由容器箱、 自动进样器、检测部、输液部、柱温箱、系统控制器、 Easy3000 工作站和电脑等组成。 准备 准备所需的流

目的 
   
规范日本岛津LC-2010A高效液相色谱仪的使用。 

范围 
   
适用于日本岛津LC-2010A高效液相色谱仪的使用。 

规程 
    
系统组成 
   液相色谱仪由容器箱、 自动进样器、检测部、输液部、柱温箱、系统控制器、Easy3000工作站和电脑等组成。 
    
准备 
    
准备所需的流动相,用合适的0.45μm滤膜过滤,超声脱气至少20min
    
根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱(注意方向)。 
    
配制样品和标准溶液(也可在平衡系统时配制),用0.45μm滤膜过滤。 
    
检查液相色谱仪各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。 

开机 
    F2 
接通电源,按下系统控制器面板上的电源开关上托画面上显示要输入Login Pass-ID-No的对话框,输入00000后,按 [OK]显示Menu画面,选择Method画面,在Method画面进行相关参数设定,然后打开电脑显示器、主机,最后打开色谱工作站。 
    
参数设定 
    
波长设定  Method画面上,将光标置于UV-VIS检测器波长设定的栏内,用数字键输入所需波长值,按[Enter]键确认。 
    
流速设定  Method画面上,将光标置于流量设定的栏内,用数字键输入所需的流量(柱在线时流量一般不超过1ml/min),按[Enter]键确认。 
    
流动相比例设定  Method画面上,将光标置于流动相混合比率设定的栏内,在A-D上,用数字键输入所需流动相的混合比率,按[Enter]键确认。 
    
  Method画面上,将光标置于柱温箱温度设定栏,用数字键输入柱温箱所需的温度,按[Enter]键确认。 

更换流动相并排气泡 
    
将管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中; 
    
逆时针转动泵的排液阀180°,打开排液阀; 
    
Method画面上,按[purge]键显示清洗设定的上托画面,pump键旁的绿指示灯亮,输液泵开始工作。 依次按下使用的流动相通道和冲洗液通道的功能键,即流路、流路B、流路、流路D及自动进样的冲洗液 ,泵大约以8ml/min的流速冲洗,清洗完成后自动停止。 

将排液阀顺时针旋转到底,关闭排液阀。 
    
如管路中仍有气泡,则重复以上操作直至气泡排尽。 
    
如按以上方法不能排尽气泡,从柱入口处拆下连接管,放入废液瓶中,设流速为5ml/min,按[pump]键,冲洗3min后再按[pump]键停泵,重新接上柱并将流速重设为规定值。 
    
平衡系统 
    
按《Easy3000色谱数据工作站操作规程》打开“Easy3000色谱工作站软件,输入实验信息并设定各项方法参数后,等待系统平衡。 
    
等度洗脱方式 
    
按泵的[pump]键,泵启动,pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统,一般最少需6倍柱体积(约30min)的流动相。 
    
检查各管路连接处是否漏液,如漏液应予以排除。 
    
观察泵控制屏幕上的压力值,压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡。
    
观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min,噪声为<0.001mV时,可认为液相色谱仪已达到平衡状态,可以进样。 
    
梯度洗脱方式 
    
以检验方法规定的梯度初始条件 
    
在进样前运行1~2次空白梯度。 

进样 
    
进样前按检测器[zero]键调零,按软件中 [零点校正按钮校正基线零点。 
    
按下系统控制器面板上的Run键,液相色谱仪自动进样。 

清洗柱及进样系统和关机 
    
数据采集完毕后,关闭检测器,继续以工作流动相冲洗20min后,(如流动相含缓冲盐,换为不含缓冲盐的同比例流动相在冲洗20min),再换用纯水冲洗系统及色谱柱至少60min,最后用甲醇或乙腈冲洗至少30min 
    
冲洗完柱后,将整个流路都置于有机溶剂中,清洗整个流路及进样系统。     

清洗完成后,先将流量降到0,关闭电源开关。 
    
每次实验完毕,均需更换循环瓶中的水。 

认真填写液相色谱仪使用记录。

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(责任编辑:admin3)
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